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荧光共振能量转移(FRET)是一种非辐射能量转移过程,其中一个激发的荧光团(供体)将能量转移到另一个荧光团(受体)。FRET在各种生物传感应用中具有多功能性,因为它提供了测量分子相互作用、距离和构象变化的灵敏且非侵入性方法。
原理和机制
FRET通过以下机制发生:
供体和受体荧光团之间的距离小于10纳米时,供体激发态能量转移至受体。
供体的发射光谱与受体的吸收光谱有重叠。
供体的量子产率较高,而受体的吸收横截面较大。
应用范围
FRET在生物传感领域有广泛的应用,包括:
蛋白质-蛋白质相互作用研究
DNA和RNA的构象变化
酶活性测量
细胞内信号转导
疾病诊断和治疗
多功能性
FRET的的多功能性源自于其可调整性和可定制性:
荧光团选择:可用范围广泛的供体和受体荧光团,具有不同的光谱特性和亲和力。
距离依赖性:FRET效率与供体-受体距离成反比,可用于测量分子相互作用或构象变化。
灵敏度:FRET对小距离变化和构象扰动高度敏感,提供高分辨率的生物传感。
非侵入性:FRET探针可以融合到目标分子中或直接应用于细胞,而不会干扰其功能。
蛋白质-蛋白质相互作用研究
FRET是研究蛋白质-蛋白质相互作用的强大工具。通过在相互作用蛋白中标记供体和受体荧光团,可以在活细胞中实时监测相互作用的形成和断裂。
DNA和RNA的构象变化
FRET可以探测DNA和RNA分子的构象变化。标记在寡核苷酸链上的荧光团可以报告由于配体结合、温度变化或酶活性引起的结构变化。
酶活性测量
FRET可用于测量酶活性。通过将供体和受体荧光团连接到酶的底物或产物,可以监控底物转化或产物释放过程中的FRET变化,从而量化酶活性。
疾病诊断和治疗
FRET在疾病诊断和治疗中具有应用潜力。例如,基于FRET的探针可用于检测生物标志物、监测疾病进展或靶向药物递送。
FRET是一个多功能荧光工具,在生物传感应用中具有广泛的应用。其可调性和定制性使其适用于研究蛋白质-蛋白质相互作用、DNA和RNA构象变化、酶活性、细胞内信号转导和疾病诊断与治疗。随着荧光团设计和技术进步的不断发展,FRET有望在生物医学研究和临床应用中发挥越来越重要的作用。
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